Criopreservação de eixos embrionários de café (Coffea arabica L.)

Abstract

Eixos embrionários de Coffea arabica L. foram isolados de sementes contendo diferentes teores de umidade, congeladas ou não em nitrogênio líquido. A viabilidade de eixos isolados de sementes que não foram congelados em NL foi de 100%, independente do seu teor de umidade inicial. Estes eixos apresentaram coloração vermelha intensa e uniforme após o teste de tetrazólio, indicando que os tecidos estavam viáveis e intactos. A viabilidade de eixos isolados de sementes congeladas em NL foi determinada pelo seu teor de umidade inicial. Um total de 86% dos eixos isolados de sementes com 12.6% de umidade permaneceram viáveis após a criopreservação, exibindo coloração vermelha intensa e uniforme após o teste de tetrazólio. Apenas 7% dos eixos isolados de sementes com 29.4% de umidade permaneceram viáveis depois de congelados em NL; a maioria apresentou extensas áreas de coloração branco-leitosa, indicativo de morte dos tecidos. Os resultados obtidos sugerem que a criopreservação de eixos embrionários de café é uma alternativa viável para a conservação do germoplasma desta valiosa cultura. O protocolo descrito no presente trabalho é simples, não requer uso de crioprotetores químicos ou congeladores programáveis e propicia alta porcentagem de sobrevivência.

The effect of water content on the survival of embryonic axes of Coffea arabica to freezing in liquid nitrogen was investigated as part of the effort to develop a cryopreservation protocol for this species. Axes were excised from seeds at different water contents, both frozen in liquid nitrogen or non-frozen controls. The viability of axes excised from control non-frozen seeds was 100%, regardless of their initial water content. Axes exhibited uniform dark red colour following TTZ test, suggesting the tissues were viable and intact. In contrast, the initial water content of cryopreserved seeds determined the viability of excised axes. Up to 86% of the axes excised from seeds containing 12.6% of water remained viable after cryopreservation. After the TTZ test these axes showed bright red coloration throughout. However, only 7% of the axes isolated from seeds containing 29.4% moisture content were viable after freezing in liquid nitrogen. Most of these axes showed large white areas, an indication that tissues were killed during the freezing/thawing procedure. The cryopreservation procedure described here is simple, does not require the use of chemical cryoprotectants or expensive programmable freezers, and most importantly yields high survival percentages. The results obtained suggest that cryopreservation of embryonic axes is a good alternative for germplasm conservation of coffee.