DESINFESTAÇÃO DE EXPLANTES FOLIARES DE CAFÉ CONILON (Coffea canephora PIERRE) PARA ESTABELECIMENTO IN VITRO

Abstract

A cultura de Coffea canephora Pierre é extremamente relevante na agricultura de Rondônia, o segundo estado produtor e responsável por 15% da produção da variedade Conilon no país. O objetivo deste trabalho foi o estabelecimento de um protocolo eficiente de descontaminação de explantes foliares, visando à sua introdução em estudos de calogênese e embriogênese somática. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Cultura de Tecidos Vegetais da Embrapa Rondônia. As folhas foram lavadas em água bidestilada com auxílio de esponja e detergente. Em câmara de fluxo laminar, as mesmas foram imersas em etanol a 70% (v/v) por 1 minuto e colocadas em soluções de hipoclorito de sódio nas concentrações de 1,00, 1,25 e 1,50% (v/v), nos períodos de 10, 20 e 30 minutos, sendo, em seguida, segmentadas em pedaços de 1 cm2 e inoculados em meio MS. Os cultivos foram mantidos em câmara tipo BOD, no escuro e com temperatura de 24±2oC. Cada unidade experimental foi constituída de 10 explantes. Os dados obtidos foram submetidos à análise de variância, utilizando-se o teste de Tukey, ao nível de 5% de probabilidade, agrupando-se as médias em classes distintas. Foi realizada uma avaliação dez dias após a inoculação. Os aspectos avaliados foram a porcentagem de contaminação e a porcentagem de explantes necrosados e oxidados. Os tratamentos mais eficazes para a desinfestação das folhas foram os que combinaram 30 minutos de imersão com as concentrações de 1,25 e 1,50% de hipoclorito de sódio, resultando em 15% de contaminação nos dois tratamentos. Porém, o tratamento que combinou 30 minutos com 1,50% de hipoclorito resultou em alto nível de oxidação (50%). O tratamento no qual se utilizou 1,00% de hipoclorito por 10 minutos foi o que resultou em maior nível de contaminação, chegando a 60% dos explantes inoculados, além de 10% de oxidação. Considerando-se as variáveis avaliadas, recomenda-se a utilização de 1,25% de hipoclorito, por um período de 30 minutos de imersão.

The Coffea canephora Pierre culture is extremaly important on Rondônia agriculture, the second state producer on the country, that contributes with 15% of the production of Conilon cultivar. The objective of this work was the establishment of an efficient protocol of decontamination of leaf explants of this cultivar to carry through studies of calogenesis and somatic embryogenesis. The experiments had been carried through in the Laboratório de Cultura de Tecidos Vegetais of Embrapa Rondônia. The leaves were washed in bidistilled water with detergent. In laminar flow chamber, they were immersed in 70% etanol (v/v) for 1 minute and sodium hipoclorite on the concentrations 1,00, 1,25 and 1,50% (v/v) for 10, 20 and 30 minutes. Leaves were cut in pieces of 1 cm2 and inoculated in MS medium. Cultures were kept in BOD chamber at dark and 24+2°C. Experimental unit was constituted of 10 explants. An evaluation was carried through ten days after inoculation, considering the percentage of contamination, necrosis and oxidation. The treatments most efficient for decontamination were 30 minutes of immersion and sodium hipoclorite 1,25 and 1,50%, resulting in 15% of contamination in both treatments. However, 30 minutes of immersion in 1,50% sodium hipoclorite results in high level of oxidation (50%). 1,00% of hipoclorite for 10 minutes results in higher contamination reaching 60% and 10% of oxidation. For efficient decontamination it is recommendable the use of 1,25% sodium hipoclorite for 30 minutes of immersion.