Expressão diferencial de proteínas em raízes de Coffea canephora infectadas com o nematóide endoparasita Meloidogyne paranaensis

Abstract

Muitos estudos têm focado na caracterização funcional de proteínas codificadas por genes de resistência a diversos patógenos. Neste estudo, a expressão de proteínas durante a interação entre a planta de café resistente, Coffea canephora e o patógeno Meloidgyne paranaensis foi realizada. Raízes de C. canephora foram infectadas com inóculos do nematóide na fase de juvenis (J2) com aproximadamente 1000 larvas por planta no total de 24 plantas. As raízes foram coletadas em um intervalo de tempo de 3, 6 e 10 dias após a infecção. Raízes não infectadas foram utilizadas como controle. As raízes foram lavadas com uma solução de água e hipoclorito de sódio a 10%; congeladas e armazenadas a -80ºC . O material foi utilizado para extração de proteínas, que foram submetidas a eletroforese bidimensional (2-DE). Os resultados obtidos através de 2-DE revelaram várias proteínas diferenciais nos diferentes tempos após a infecção quando os mapas foram comparados à condição controle. Na análise dos mapas de tempo 3 , 5 proteínas diferencias foram visualizadas. Enquanto que os mapas de tempo 6 e 10 revelaram 6 e 5 proteínas diferenciais, respectivamente. Essas proteínas deverão ser identificadas através de espectrometria de massa na tentativa de associá-las ao processo de resistência ao nematóide Meloidgyne ssp , já que os mecanismos de defesa de plantas envolvem a expressão de proteínas específicas associadas ao reconhecimento do patógeno, ativando uma gama de outras proteínas responsáveis pela resistência.

Recent studies have focused on the functional characterization of proteins encoded by pathogen resistance genes. In this study, we have analyzed the protein expression of coffee roots during the interaction of the resistant plant Coffea canephora and the pathogen Meloidgyne paranaensis. Roots were infected with nematodes in the J2 phase with approximately 1000 larvae per plant. The roots were obtained 3, 6 and 10 days after infection and non-infected roots were used as control. The roots were washed, stored at -80ºC and then used for protein extraction and bidimensional electrophoresis (2-DE). The results obtained by 2-DE revealed several differentially expressed proteins in the infected tissues. The protein profiles obtained from the tissues 3, 6 and 10 days after infection revealed 5, 6 and 5 differential proteins, respectively. These proteins will be identified by mass spectrometry in an attempt to associate them to the resistance process, since the defense mechanisms in plants involve the expression of specific proteins associated to the recognition of the pathogen, activating other proteins responsible for resistance.