Avaliação do ácido cítrico na multiplicação e regeneração de calo embriogênico friável de café (Coffea arabica L.)

Abstract

A embriogênese somática em café (Coffea arabica L.) depende da produção de calos embriogênicos friáveis, os quais devem ser multiplicados de tal forma a permitir a produção de um estoque mínimo de células. A multiplicação em meio gelificado, embora possível, não é a forma mais apropriada para induzir um aumento satisfatório do estoque inicial de células embriogênicas. O meio líquido, por sua vez, constitui a forma mais adequada para induzir a multiplicação celular. Visando preparar inóculo de células embriogênicas para uso em biorreatores, amostras de calos embriogênicos friáveis obtidos de folhas de ‘Catuaí Vermelho’ foram inoculadas em meio líquido em Erlenmeyers mantidos sob agitação a 100 rpm, no escuro, sob temperatura de 25-27ºC. A densidade de células inoculadas foi de 10,0 g/L, tendo sido testado ácido cítrico nas concentrações de 0,0; 250,0 e 500,0 mg/L. O meio de cultura utilizado foi o de MS, meia força, suplementado, por litro, de 10 mg de tiamina, 1 mg de piridoxina, 1 mg de ácido nicotínico, 1 mg de glicina, 100 mg de mio-inositol, 10 mg de L-cisteína, 100 mg de caseína hidrolisada, 200 mg de extrato de malte e 2% de sacarose. Como reguladores de crescimento, foram adicionados 2,0 mg/L de 2,4-D, 2,0 mg/L de 2-iP e 1,0 mg/L de IBA. A taxa de aumento no peso da matéria fresca foi calculada pela formula TCR=(lnPFf-lnPFi)/t, sendo PFf o peso da matéria fresca final, PFi o peso da matéria fresca inicial e t o tempo em dias. O tempo de dobramento da material fresco foi calculado pela formula dt=0,693/TCR. O subcultivo foi conduzido a cada 15 dias e a avaliação do peso da matéria fresca, aos 30 dias. A TCR foi maior em todos os tratamentos para os períodos de 30 e 60 dias, variando de 0,0459 a 0,0707 g/g/dia, com um dobramento da matéria fresca a cada 9,8 a 15,1 dias. Por outro lado, a TCR foi consideravelmente menor aos 90 dias de cultivo, com TCR variando de 0,0331 a 0,0390 g/g/dia e um dobramento de peso entre 17,8 a 21,1 dias. Após 30 dias de cultivo em meio de multiplicação, amostras de células embriogênicas foram retiradas e inoculadas em meio de regeneração, contendo meio básico, acrescido de 2,0 mg/L de BAP e 0,25 mg/L de ANA, na ausência de ácido cítrico. A avaliação final foi conduzida após 60 dias de cultivo, com a pesagem total dos embriões, retirada de uma amostra, pesagem e contagem dos embriões na amostra. A TCR dos embriões variou de 0,0380 a 0,0555 g/g/dia, com um tempo de dobramento do peso de 12,5 a 18,3 dias. A TCR foi menor na concentração correspondente a 500,0 mg/L de ácido cítrico. O número de embriões por grama de calos embriogênicos inicialmente inoculados foi de 390, 4.703 e 18.729, respectivamente, para as concentrações de 0,0; 250,0 e 500,0 mg/L de ácido cítrico utilizadas no meio de multiplicação. Pelo menos tomando como referência o presente experimento, a presença de ácido cítrico no meio de multiplicação contribuiu para a manutenção da capacidade regenerativa de embriões a partir de calos embriogênicos de café.